體外培養(yǎng)的細(xì)胞受到嚴(yán)重污染時(shí),即使想盡辦法也難以挽回。如何打贏這場細(xì)胞保衛(wèi)戰(zhàn)?最好的方法是從一開始就杜絕污染發(fā)生的可能。
注意細(xì)胞房中的這些雷區(qū),做好抵御細(xì)胞污染的“戰(zhàn)前”部署,將 7 大污染頻發(fā)的實(shí)驗(yàn)“雷區(qū)”各個(gè)擊破,讓污染源們無處躲藏!保障實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。
雷區(qū)一 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室入口
除了細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室專門配置的通風(fēng)系統(tǒng),入口處就是“無菌凈土”與外面“花花世界”的唯一聯(lián)通之處,這也是我們狙擊污染的第一要塞。
身為“無菌凈土”,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的選址一般都頗有講究,必須設(shè)置在一個(gè)僻靜的角落,以免人來人往造成干擾。奢華型細(xì)胞房配有特制的通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)。對于標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞房,黏性門墊則必不可少。 無論誰都能進(jìn)入細(xì)胞房嗎?NO!只有熟記無菌操作要點(diǎn)的人員才能拿到入場券。進(jìn)入細(xì)胞房之前,我們還要向所有與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的隨身物品一一告別。經(jīng)過一番折騰后,大門終于為你打開,趕緊換上細(xì)胞房專用的白大褂和拖鞋,然后洗手,消毒,戴上手套,再消毒。記住,一步都不能少!?。?nbsp;
雷區(qū)二 水浴鍋
適宜的溫度和生長環(huán)境使水浴鍋成為了細(xì)胞房中各種污染源的最佳“溫床”。水浴鍋一直都是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室污染源聚集的重災(zāi)區(qū)。因此,對其進(jìn)行定期消毒是必須的。除此之外,我們還可以向水浴中加入適量的殺菌劑來抑制各種細(xì)菌、真菌的滋長。
水浴時(shí),我們必須確保容器的瓶蓋不與水接觸。因?yàn)槲廴驹纯赡軙诖藭r(shí)通過瓶蓋的縫隙順勢留在瓶口,等下一次傾倒液體的時(shí)候,整個(gè)實(shí)驗(yàn)就遭了殃。水浴結(jié)束后,要記得將蓋子蓋上??赡艿脑?,可以用金屬浴替代水浴。金屬浴的相關(guān)設(shè)備更易清潔,使用也更加省心。用恒溫孵育器代替水浴鍋,確保溫控精確性和均一性的同時(shí)也減少了污染的概率。
雷區(qū)三 顯微鏡
通過顯微鏡定期檢查細(xì)胞的匯合程度以及外觀和形態(tài)是“細(xì)胞飼養(yǎng)員”的必修課。但頻繁地與不同細(xì)胞系接觸,使顯微鏡也成了污染的高發(fā)地。 當(dāng)我們在顯微鏡下觀察細(xì)胞或其它培養(yǎng)物時(shí),切忌敞口放置培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶。這樣不僅容易造成溶液飛濺,還有可能在觀察時(shí)污染物鏡,并進(jìn)一步造成交叉污染。在顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞檢測,一定要快和穩(wěn)。在從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞前就提前做好準(zhǔn)備工作,可以為鏡下作業(yè)節(jié)省更多時(shí)間。
雷區(qū)四 CO2培養(yǎng)箱
CO2培養(yǎng)箱不僅是細(xì)胞的搖籃,同時(shí)也是污染的蜜罐,防污染工作不容忽視。CO2培養(yǎng)箱是抵御細(xì)胞污染的一大重鎮(zhèn),連開關(guān)門的操作都須慎之又慎。培養(yǎng)箱的開關(guān)門除了會立即影響到箱體溫度、濕度和對 pH 的調(diào)節(jié)外,也讓箱外空氣的或環(huán)境中的污染物有機(jī)可趁。因此,培養(yǎng)箱的開門時(shí)間能短則短,開門次數(shù)越少越好。選擇帶有玻璃內(nèi)分門的培養(yǎng)箱可以降低污染的風(fēng)險(xiǎn),同時(shí)也能避免環(huán)境條件在開關(guān)門后有驟然改變。不同于生物安全柜,在日常使用過程中,培養(yǎng)箱不能防止空氣傳播的污染物流入。有些培養(yǎng)箱采用內(nèi)腔 HEPA 濾器去除箱體內(nèi)的微生物,但如果濾器沒有定期更換,它就會搖身一變成為污染的傳染源。除了過濾器,培養(yǎng)箱的承液盤也容易滋生細(xì)菌,建議每周使用無菌用水(如: 無菌蒸餾水)更換,并做好定期消毒工作。此外,承液盤本身也必須清潔消毒。承液盤如果呈綠色,須用過氧化氫來清潔和沖洗。注意!CO2培養(yǎng)箱是不能直接放在地板上的。帶腳輪的底座除提供靈活的移動便利性,也保持箱體離開地面,當(dāng)實(shí)驗(yàn)人員開關(guān)門時(shí),使地面上的灰塵不易進(jìn)入箱體內(nèi)。
許多培養(yǎng)箱箱體內(nèi)有許多隱蔽的角落、焊縫、風(fēng)道和風(fēng)扇,這些地方也是細(xì)菌喜歡藏匿的地方,必須格外注意。最好選擇配置有高溫滅菌的功能的培養(yǎng)箱,可對箱體進(jìn)行自動消毒。一體成型無焊接縫的銅質(zhì)箱體的培養(yǎng)箱也可以有效降低污染風(fēng)險(xiǎn),抑制細(xì)菌的生長。內(nèi)腔一體式和圓角設(shè)計(jì)使易培養(yǎng)箱清潔起來更為方便,防止污染形成。
實(shí)驗(yàn)人員的不規(guī)范操作也會使污染風(fēng)險(xiǎn)大增!首先,在操作培養(yǎng)箱時(shí)務(wù)必佩戴無菌手套。有可能的話,我們應(yīng)全部使用培養(yǎng)瓶,以防止抓取培養(yǎng)皿時(shí)蓋子意外散落,造成溶液飛濺。特別要注意的是,在開放的培養(yǎng)箱前不能交談,以防止唾液飛濺,造成污染。每隔 6–8 周,我們應(yīng)將培養(yǎng)箱完全清空,進(jìn)行清洗:先用肥皂水和清水清潔箱體和部件,再用 70% 酒精或無腐蝕性的消毒劑來擦拭消毒整個(gè)腔體,包括隔板、隔板架等部件。
雷區(qū)五 生物安全柜
生物安全柜是我們進(jìn)行大部分實(shí)驗(yàn)操作的場地,因此,所有無菌操作的“金科玉律”在此都會變得更為重要。通常來說,生物安全柜中的物品排列不應(yīng)太過擁擠,所有與當(dāng)前實(shí)驗(yàn)無關(guān)的東西應(yīng)清出桌面。試劑和儀器盡可能往里放,留出廣闊天地,大干一場,但是,千萬不能堵住排風(fēng)口。在擺放或者實(shí)驗(yàn)過程中,出現(xiàn)液體飛濺的情況,應(yīng)當(dāng)馬上用消毒劑擦拭,以防后患。在開始實(shí)驗(yàn)前,我們必須對超凈臺進(jìn)行全面消毒,簡單的噴霧可解決不了什么問題,正確的做法是對整個(gè)機(jī)柜表面進(jìn)行擦拭。還有一件事必不可少,那就是事先打開安全柜通風(fēng)系統(tǒng),流通空氣,直到原有的內(nèi)部濁氣都被排出。
消毒完畢后,我們就要給實(shí)驗(yàn)用品“分家”了。一般來說,我們可以將超凈臺分為潔凈區(qū)、工作區(qū)和廢棄區(qū)三大板塊,以免手忙腳亂發(fā)生交叉污染。可別一時(shí)疏忽,把“臟物”放到潔凈區(qū)哦!如果你是右撇子,不妨試著按上圖“排兵布陣”做好一系列準(zhǔn)備后,開啟實(shí)戰(zhàn)模式。作戰(zhàn)區(qū)域不宜選擇敞口容器。無菌容器的使用應(yīng)遵循即用即關(guān)的原則。具體操作時(shí),管好你的手,不能伸到容器內(nèi)部,行動要輕緩,以免動作過大阻礙空氣流通。使用明火同樣會導(dǎo)致氣流紊亂,我們應(yīng)該盡量避免。
怎么放置容器的瓶蓋也很有講究。如果超凈臺的桌面干凈,可以將瓶蓋扣在桌面上;反之,則須倒置瓶蓋,當(dāng)然,這時(shí)候就需要避免在瓶蓋上方進(jìn)行操作了。選擇能夠側(cè)置的瓶蓋,就不必再為瓶蓋放置問題糾結(jié)了。能夠側(cè)置的瓶蓋,解救你的選擇困難癥。移液時(shí)應(yīng)避免吸頭接觸試管或培養(yǎng)瓶內(nèi)部。此外,使用紫外燈時(shí),要注意監(jiān)測運(yùn)行時(shí)間并及時(shí)檢修。掌握了以上安全柜守則, 你的細(xì)胞也將更安全。
雷區(qū)六 離心機(jī)
和顯微鏡一樣,離心機(jī)也是交叉污染的重災(zāi)區(qū)。平日里我們應(yīng)保持離心機(jī)蓋關(guān)閉,拒污染于千里之外。離心機(jī)內(nèi)部的小縫隙也是藏污納垢之處,定期清潔轉(zhuǎn)子和腔室至關(guān)重要。
雷區(qū)七 窗戶
其實(shí),很多細(xì)胞房根本沒有窗戶,即使配有窗戶,也基本上就是擺設(shè)。如果你的細(xì)胞房恰好有一扇窗,那么你必須注意了,因?yàn)闊o論什么時(shí)段,窗戶都不允許打開。一旦打開,許多細(xì)菌會乘機(jī)夾雜在空氣中溜入細(xì)胞房,后果不堪設(shè)想。陽光的刺激同樣會對室內(nèi)環(huán)境造成影響,有窗戶的實(shí)驗(yàn)室必須緊閉窗門同時(shí)拉上窗簾,并做好請勿開啟的警示標(biāo)記。
無菌操作在于細(xì)節(jié),更在于態(tài)度,即使現(xiàn)在久經(jīng)沙場的你已經(jīng)對細(xì)胞培養(yǎng)駕輕就熟了,也別因?yàn)椴襟E繁瑣就敷衍了事,掉以輕心。俗話說得好,你今天在無菌操作上省下的時(shí)間,都會花在明天細(xì)胞污染重做實(shí)驗(yàn)上。
實(shí)驗(yàn)室安全措施⑴實(shí)驗(yàn)室內(nèi)必須配備通風(fēng)櫥、防塵罩、排氣管道及消防滅火器材等安全設(shè)施,并定期進(jìn)行檢查...
近日,據(jù)陜西省科技廳消息:科技部發(fā)布第四批國家“一帶一路”聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室建設(shè)名單,陜西2家“一帶一路”聯(lián)合實(shí)驗(yàn)...
為加快推動能源領(lǐng)域陜西實(shí)驗(yàn)室建設(shè)步伐,9月12日,陜西省科技廳在榆林中科潔凈能源創(chuàng)新研究院組織召開能源陜西...